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白DsRed吸收截面光譜但是，巨幅提高每個時間和面積上可用光子數量對圖像的真正影響是什么呢？一、更高的激發效率，更高的圖像亮度理論上，在雙光子顯微鏡中，圖像的亮度與激發效率直接相關，而激發效率完全依賴于光子通量和熒光團的二階非線性激發截面(GM) 。作為一個例子，我們可以嘗試計算熒光蛋白mRFP在15fs激光脈寬（如SCH飛秒激光器）和1050nm中波長照射下的激發效率。與100fs的激光器相比，15fs激光器具有更寬的帶寬（達200nm），可以在900到1200nm之間激發mRFP，與100fs激光器的11nm相比，這是一個更寬的光譜區域。圖3：藍色曲線：以1050nm為中心的SCH 15f ...
微小的雙光子吸收截面將熒光產生限制在顯微鏡物鏡的聚焦體積內。為了對樣品中的單個光學截面進行成像，2PFM在二維掃描激發焦點并記錄每個位置的熒光信號，衍射極限焦點提供z亮的熒光信號以及z高的空間分辨率。然而，只有通過自適應光學(adaptive optics, AO)才能維持在體深度的高空間分辨率，自適應光學可以測量和校正成像光穿過光異質樣品時在波前積累的光學像差。AO與2PFM相結合，將校正的相位模式應用于物鏡后瞳平面(back pupil plane)的激發波前，可以實現衍射極限性能，并且可以在大腦表面以下數百微米處解析突觸。大腦的在體成像也需要高時間分辨率，對于大腦內的功能成像，需要亞秒級 ...
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