彈性散射光片熒光顯微鏡的應用摘要：FYLA匯編了一些客戶的實驗室設置，以幫助您創建有效的實驗。本指南包含了一些致力于光子學的主要實驗室的設置，講述了FYLA在彈性散射光工作表熒光顯微鏡的應用。彈性散射光片熒光顯微鏡：LSFM中偏振和相干控制的建立：光片照明路徑由一對515 nm和638 nm波長的二極管激光器和FYLA超連續光譜激光器(Iceblink)組成。激光束被擴展10次后進入顯微鏡。P1為半波片(HWP)，控制三束光在通過圓柱透鏡前的偏振(CL)、反射鏡(GM)和照明物鏡(OBJill)。GM在OBJill的瞳孔處掃描光束，在樣品平面上產生一個旋轉的光片。樣品保存在一個定制的浸泡室(C ...

固態光源點亮熒光原位雜交技術---提升生物醫學研究和臨床診斷新選擇什么是FISH？當然這里的FISH并非水里游的魚類，而是熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization，簡稱FISH），這是一種基于雙鏈核酸互補堿基配對的細胞或者組織中特定核酸序列（DNA或者RNA）檢測的技術。就如同釣魚一般，根據堿基互補原則，當使用已知標記單鏈核酸為探針（餌），如果與樣品中的未知單鏈核酸（魚）發生了特異性結合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸，并對該特定核酸順序進行精確定量定位。F:熒光（Flourescence）顯微鏡用于對靶核酸序列位置進行成像。該技術的其他變體也使用顯色原位 ...

革新多路復用熒光檢測長久以來，在復雜、異質的樣品中同時識別以及定位多個分子或者分子組裝的能力一直是推動熒光顯微鏡在生物和物理科學研究中應用的主要特性。例如，自1986年以來，使用四種光譜上的不同熒光團來識別DNA中的腺嘌呤（A）、胸腺嘧啶（T）、胞嘧啶（C）和鳥嘌呤（G）堿基，這一直是大多數自動化DNA測序技術的基礎。然而，對大規模生物系統的基因組和轉錄組的研究可能需要同時識別和定位成百上千的分子標靶。這種高度并行的分析超出了基于光譜鑒別的多路復用能力。Lumencor分析了基于光譜鑒別的多路復用熒光檢測的局限性，以及為擴大可檢測標靶數量而引入的一些固態光源新技術。光譜鑒別的局限性大多數多路復 ...

門控拉曼的熒光抑制方法及分類門控法屬于時域法。前兩種方法的主要優點是考慮了拉曼散射和熒光響應的不同時間行為。第三種方法利用了即使在不同波長下熒光也具有更寬光譜特性的事實，而拉曼發射光譜與激發波長耦合。該方法值得注意的技術包括位移激發拉曼差分光譜(SERDS)和減位移拉曼光譜，兩者都需要在光譜采集之后進行額外的步驟。將傳統的連續波拉曼系統轉換為基于CCD光譜儀的SERDS設置只需要小小的修改，即合并兩個稍微波長移位的激光激發源，通常在全寬半MAX(FWHM)時分開。一旦熒光變寬或扭曲拉曼峰，計算方法提高信噪比的能力有限。另一個缺點是，由于像素對像素靈敏度的隨機變化大于實際的拉曼信號，它們可以忽略 ...

引擎用于多重熒光檢查十多年以來，Lumencor的SPECTRA X光引擎一直是熒光顯微鏡領域的第1選擇，以其多功能性和卓越性能而著稱。它為研究人員提供了激發光譜的精確控制，在z小化串擾（crosstalk）、光譜滲漏（bleed-through）、自發熒光（autofluorescence）以及其他有害背景來源的同時也優化了激發的效率【1】。SPECTRA X光引擎（2023）在其新版本中保留了用戶可更換的帶通濾光片，同時引入幾項重大改進：擴展光譜內容：新型號采用固態LED光源，增大了光譜范圍，同時增強了與帶通濾光片和熒光基團的兼容性，其中包括 365 nm 和 660 nm 處的新激發窗口 ...

- mpt是熒光壽命成像的合適探測器。2. CCDs and ICCDs一般來說，ccd是RS中特別常用的檢測器變體，但對于TG設置，它們需要高度敏感(單光子計數能力)，允許快速外部觸發，并具有亞納秒范圍內的時間分辨率。iccd符合這些要求。光學克爾門控，它的作用就像光譜儀入口狹縫前的一個光百葉窗，已經被幾個小組用來觸發CCD。這種設置需要空間，因此限制了系統的可移植性。Talmi制定了拉曼多通道和門控檢測的選擇指南。1993年，Tahara和Hamaguchi首先通過構造一個增強的基于ccd的條紋相機實現了高靈敏度和良好的時序分辨率。TG拉曼裝置中的條紋相機將樣品的背散射光引導到光電陰極上; ...

理論上證明了熒光干涉還原的概念。另一位先驅是Richard Van Duyne，他也是表面增強拉曼效應的發現者之一。1974年，Van Duyne研究小組首次通過實驗證明，使用羅丹明6g染料摻雜苯樣品可以抑制熒光，同時通過光電倍增管(PMT)和脈沖氬離子激光源在488nm激發下的組合來提高信噪比。1976年，Yaney使用與Van Duyne等人類似的裝置，但使用不同的脈沖激發源(ps脈沖Nd:YAG, 532 nm摻釹釔鋁石榴石激光器)，發現TG拉曼與連續拉曼相比，在較短的激光脈沖寬度(約200 ns)下顯著改善了苯中吖啶橙的三個主要拉曼波段的光譜結果。他還指出，環境光不會干擾門控拉曼光譜結 ...

間門和伴隨的熒光抑制。根據圖1(a)所示的工作原理，探測器僅在發射脈沖期間被激活，如圖1(b)所示。圖1(c)顯示了門控(虛線)和連續光(連續線)工作模式之間的差異，每種模式都有一個有效的拉曼光譜。直到zui近，門控拉曼光譜儀的復雜性、尺寸和價格阻礙了它的廣泛應用。過去已經使用了不同類型的探測器，例如多通道板(mcp)，光倍增管(pmt)和超快速和強化電荷耦合器件(iccd)，帶有或沒有克爾門。從本質上講，這些設備需要探測器冷卻，因此非常復雜和笨重(見表1)。自世紀之交以來，互補金屬氧化物半導體(CMOS)單光子雪崩二極管(SPAD)陣列探測器已經商業化。CMOS spad具有顯著減少上述缺點 ...

點是樣品誘導熒光發射。這是一個競爭現象，發生在相對較弱的拉曼散射下，并且可以模糊整個拉曼光譜，使材料的識別或量化成為不可能。解決這一問題的有效方法是時間門控(TG)，這是信號處理中常用的一種技術。熱重光譜的目的是測量特定時間段內的信號，從而實現對瞬態過程的監測。早在20世紀70年代，隨著科學家們在測量過程中尋找去除熒光背景信號的方法，TG就進入了RS領域。然而，TG拉曼直到zui近幾年才開始商業化。為了擴大RS的普遍適用性，克服熒光限制是很重要的。RS基于從激發波長位移的光子的非彈性散射，稱為Stokes和AntiStokes位移。它用于提供給定樣品中受激分子的信息。與紅外光譜(IR)類似，該 ...

輸出用于激發熒光血管造影劑---吲哚菁綠（ICG）。除了光譜輸出外，SPECTRA光引擎還提供了三個附加功能，可增加其在術中成像應用中的實用性：1.光傳輸SPECTRA光引擎的光輸出通常以光纖束傳輸。光纖束可以進行分支，提供兩路或者多個等分的光輸出，這些光輸出可以憑借不同的角度軌跡定向到手術區域。多向照明規避了可訪問性和可見性的限制，在手術區域等密閉空間中實現三維成像。2.不同設備的一致性能這一特性對于消除外窺鏡或者其他手術設備中光源的安裝和驗證中的不確定性至關重要。因此，SPECTRA光引擎進行設計、制造和測試，旨在從一個設備到另一個設備提供一致的性能。圖3展現了這一特性，比較了50臺SPE ...