元的光損傷和熒光團的光漂白。此外，傳統顯微鏡僅限于對二維表面進行成像，而神經回路具有三維結構。深度掃描可用于構建3D圖像，但速度非常慢，因為它通常通過以大約20 Hz的速率掃描物鏡來實現。這不足以監測在一毫秒的時間尺度上發生的神經活動。對于光遺傳學研究，需要能夠在3D空間中動態和任意形成多個焦點的顯微鏡以監視和操縱發射模式，并且顯微鏡必須能夠進行3D成像以捕獲神經元電路的響應。在掃描雙光子/三光子顯微鏡的激發路徑中添加液晶空間光調制器（SLM），可以將激發源分成幾百個獨立的焦點，并以高達300 Hz的頻率重新配置焦點的3D位置。因此，使用SLM可以傳遞光線，同時可激發多個3D位點的神經元，然后 ...

來分析樣品中熒光團的組成，但是現有的熒光分析技術絕大部分是基于對熒光強度的測量，所以容易受到多種因素如激發光強度、熒光團濃度的影響，從而難以進行定量測量。熒光物質的熒光壽命指的是當其被激發光激發之后，該物質的分子吸收能量從基態躍遷到某個激發態，再以輻射躍遷的方式發出熒光回到基態。激發停止之后，分子激發出的熒光強度降到激發最大強度時的1/e所需的時間被稱為熒光壽命，它表示粒子在激發態存在的平均時間，一般被稱為激發態的熒光壽命。熒光壽命僅僅與熒光物質自身的結構和其所處的微環境的極性和粘度等條件有關，而與激發光強度、熒光團濃度無關，因此通常來說是絕對的。通過測定熒光壽命，我們可以直接了解所研究的體系 ...

遍使用的有機熒光團的光致發光過程僅持續幾百皮秒到幾十納秒；另外不僅要獲取熒光壽命，還要還原熒光衰減曲線形狀，通常為了解決多指數衰減，必須能夠在時間上將記錄的信號解析到這樣的程度：由幾十個樣品進行衰減。使用普通的電子瞬態記錄儀很難達到所需的時間分辨率。 另外如果發射的光太弱則無法產生代表光通量的模擬電壓。 實際上光信號可能只有每個激發/發射周期的幾個光子。 然后信號本身的離散特性導致無法進行模擬采樣。 即使可以通過增加激發功率來獲得更多熒光，也會存在限制，例如，由于收集光學損耗、檢測器靈敏度的光譜限制或在更高激發功率下的光漂白。Z終，當觀察到的樣品僅由幾個甚至單個分子組成時，就會出現問題。使用時 ...

RS可以通過熒光團和金屬納米粒子(NPs)之間的相互作用增強或減弱熒光發射強度，這取決于金屬納米粒子的形狀、熒光團分子偶極矩的方向以及熒光團發射光譜與金屬納米粒子表面等離子體共振光譜的重疊。6.當激發光的頻率接近分子的電子躍遷時，拉曼信號可以大大增強，在熒光中占主導地位。這種現象是由于拉曼光譜的光譜選擇規則，導致共振拉曼光譜。一些非線性技術，如相干反斯托克斯拉曼光譜和受激拉曼光譜(SRS)也可以顯著增強拉曼信號，同時最小化檢測到的背景熒光的比例。7.其他抑制熒光的方法還包括偏振門控、采樣光學和幾何圖形、光漂白等。您可以通過我們的官方網站了解更多顯微拉曼光譜儀的相關產品信息，或直接來電咨詢400 ...

入射光子激發熒光團分子的時間為飛秒(10-15秒)量級。其次，振動弛豫的無輻射內轉換過程也非常快，在10-14 ~ 10-11 s之間。最后，熒光發射是一個緩慢的過程，大約發生在10-9-10-7 s左右。熒光壽命是指分子在發射熒光光子前處于激發態的平均時間。圖1所示的指數衰減曲線說明了熒光發射時間的統計分布。單熒光團的熒光時間輪廓符合壽命常數τ的指數函數，而拉曼發射幾乎與激發激光同時發生。由于拉曼信號比熒光信號的發射速度快得多，因此選擇合適的時間門寬度，原則上可以在檢測拉曼信號的同時最小化熒光的貢獻。圖1.激發激光脈沖、發射拉曼散射信號和發射熒光的時間輪廓。熒光強度隨壽命呈指數衰減，而拉曼發 ...

于光子通量和熒光團的二階非線性激發截面(GM) 。作為一個例子，我們可以嘗試計算熒光蛋白mRFP在15fs激光脈寬（如SCH飛秒激光器）和1050nm中波長照射下的激發效率。與100fs的激光器相比，15fs激光器具有更寬的帶寬（達200nm），可以在900到1200nm之間激發mRFP，與100fs激光器的11nm相比，這是一個更寬的光譜區域。圖3：藍色曲線：以1050nm為中心的SCH 15fs全光纖飛秒光纖激光器的峰值功率； 橙色曲線：以1050nm為中心的100fs光纖飛秒激光器的峰值功率；黑色曲線：mRFP的二階非線性激勵截面(GM)考慮到各波長的峰值功率和激發截面，可以計算出mRF ...

去除未結合的熒光團，將樣本沉積在載玻片上，用乙醇固定，然后風干(見圖1a)。使用多模態空間光干涉顯微鏡(spatial light interference microscopy, SLIM)和落射熒光對載玻片進行成像，覆蓋相同的視野(見圖1b)。對所得圖像進行處理以提取與單個病毒顆粒相關的圖像對(見圖1c)。使用這些數據訓練U-Net卷積神經網絡，熒光圖像作為ground-truth。U-Net輸出語義分割圖，即對各種病毒類型進行分類和標記的圖像(見圖1d)。（2）圖像采集。在相襯顯微鏡(Nikon Eclipse Ti倒置顯微鏡)上集成SLIM模塊(CellVista，Phi Optics ...

同的隨機激活熒光團成像，可以實現納米級的重建分辨率。然而，對樣品透明性的要求，使得這些超分辨顯微鏡技術不可能用于被強散射介質(如生物組織、磨砂玻璃、粗糙墻角等)掩埋的物體。這些介質對光的吸收不強烈，但是擾亂了光路，產生像噪聲一樣的散斑圖樣，甚至使得樣品低分辨率的可視化都很難實現。許多方法已被證明可以克服散射效應并通過散射介質實現成像或聚焦。z直接的策略是利用彈道光子。然而，強散射介質會減少彈道光子的數量并極大地降低信號強度。某些技術需要導星(guide star)或進入散射介質的另一側，以在成像之前表征或反轉其散射效應，例如波前整形技術或傳輸矩陣測量。另一種方法依賴于光通過散射介質的記憶效應， ...

和正在開發的熒光團的峰值發射低于1000/1500 nm，但明亮的發射尾(即發射曲線的拖尾，不是峰值部分)超過1000/1500 nm，因此也非常適合NIR-II/NIR-IIb熒光成像，這包括一些極好的聚集體探針(probes in aggregates)。目前來講，明亮的長波長近紅外發射器的設計和合成仍然充滿挑戰。此外，上述光吸收在 NIR-II 熒光成像中的積極作用可能會破壞超長發射器的特權，即，成像波長越長，成像性能不一定越好。此外，有機藥劑(organic agents)一直被認為具有良好的生物相容性，但實際上很難讓有機染料同時具備長波長和強發射。由于其發射拖尾通常占整體的一小部分， ...

和發射光譜的熒光團實現的。成為當前分子層面上熒光測試的首先，廣泛應用在DNA測序、診斷、細胞成像、超分辨率顯微鏡，甚至是應用在疾病的縱向(前期)臨床研究和治療監測的體內成像。相量分析法（phasor analysis，PA）可以通過時域和頻域的轉化直接進行熒光壽命的檢測。與傳統的分析方法（比如Z小二乘法）相比，顯得更加的簡便快速，對光子數量少的情形下的測量尤為重要。數據信息的可視化和聚類分析的特點，相量分析法成為了科研工作者分析熒光壽命的不錯選擇。門控單光子雪崩二極管(SPAD)陣列在相量- flim的廣域時間的上的應用，通過門長度、門數和信號強度可以提高測量壽命精度和準確度。該探測器的功能基 ...