光器用于光片熒光顯微鏡光片熒光顯微鏡的優(yōu)點光片熒光顯微鏡（LSFM）是一種可以對活體標(biāo)本進(jìn)行快速且無光毒性3D觀測的強(qiáng)大顯微成像技術(shù)。LSFM技術(shù)將寬場成像的速度與適度的光學(xué)切片和低光漂白特點相結(jié)合，因此也被稱為選擇性平面照明顯微鏡（SPIM），或簡稱為“光片”。SPIM或LSFM共同的定義特征是從側(cè)面對焦平面進(jìn)行平面照明，在任何給定時間，僅對樣品的一小部分進(jìn)行照明，因此與寬場輻射熒光相比，可以較大限度地減少光損傷并提供改善信噪比的光學(xué)切片。此外由于圖像是以寬場（2D平行）方式收集的，因此光片成像比一次僅檢測一個像素的點掃描共聚焦顯微鏡快得多。由于三個關(guān)鍵特性，光片熒光顯微鏡正成為體積成像較流 ...

的干擾，常規(guī)熒光顯微鏡無法獲得層析圖像。三維結(jié)構(gòu)光照明顯微鏡提高分辨率、獲得層析圖像的原理，就是利用特定結(jié)構(gòu)的照明光來獲得樣品的高頻信息，采用特定算法在橫向和縱向上擴(kuò)展樣品頻域信息的同時彌補(bǔ)凹陷帶來的影響。飽和結(jié)構(gòu)照明顯微鏡(SSIM)的原理法國OXXIUS多波長合束激光器應(yīng)用在Nikon顯微鏡受激發(fā)射損耗顯微（STED）在STED顯微術(shù)中，有效熒光發(fā)光面積的減小是通過受激發(fā)射效應(yīng)來實現(xiàn)的。一個典型的STED顯微系統(tǒng)中需要兩束照明光，其中一束為激發(fā)光，另外一束為損耗光。當(dāng)激發(fā)光的照射使得其衍射斑范圍內(nèi)的熒光分子被激發(fā)，其中的 電子躍遷到激發(fā)態(tài)后，損耗光使得部分處于激發(fā)光斑外圍的電子以受激發(fā)射的 ...

pe）要介紹熒光顯微鏡，我們需要先簡單介紹一下熒光原理：在光的照射下，具有熒光特性的物質(zhì)的電子在吸收能量后，可由低能級電子層躍遷到高能級電子層。高能態(tài)的電子是不穩(wěn)定的，它會在極短的時間內(nèi)（10-8s），以輻射光的形式釋放能量后，回到原來的能態(tài)。這時發(fā)出的光即為熒光（fluorescence），其波長比激發(fā)光的波長要長，原理如圖2-6所示。利用物質(zhì)對光吸收的高度選擇性，可制成各種濾片，吸收一定波長范圍的光或允許特定波長的光通過，用來激發(fā)不同的熒光素，產(chǎn)生不同顏色的熒光。對于熒光的激發(fā)波長一般都在紫外和可見波段，而對于熒光的發(fā)射波段一般都在可見光波段觀察熒光一般都采用落射熒光觀察方式，就是激發(fā)光是 ...

大腦圖像。在熒光顯微鏡中，當(dāng)兩個獨(dú)立的光子被一種介質(zhì)同時吸收時，就會發(fā)生雙光子激發(fā)。這需要兩個合適能量的光子在這樣的介質(zhì)上時間和空間上同時重合；通常來說這不需要非常大的激發(fā)光子通量，當(dāng)然光子通量越大， 雙光子同時被吸收的概率就越大。在TPEF顯微鏡中，更高的光子通量會帶來更高的效率，從而帶來圖像質(zhì)量和分辨率的提升。在TPEF顯微鏡中，雙光子激發(fā)所需的大光子通量更多的是通過寬波段可調(diào)諧的鈦寶石飛秒激光器實現(xiàn)的，激光器典型規(guī)格脈寬為100fs，重復(fù)頻率約為80MHz，這可以給雙光子顯微鏡帶來非常高的峰值功率和大光子通量。然而，激光器較高的平均功率（在1~4瓦范圍內(nèi)）會由于激發(fā)波長的線性吸收引起的與 ...

術(shù)中，雙光子熒光顯微鏡(two-photon fluorescence microscopy, 2PFM)是對大腦這樣的不透明組織進(jìn)行成像的z流行技術(shù)，其微小的雙光子吸收截面將熒光產(chǎn)生限制在顯微鏡物鏡的聚焦體積內(nèi)。為了對樣品中的單個光學(xué)截面進(jìn)行成像，2PFM在二維掃描激發(fā)焦點并記錄每個位置的熒光信號，衍射極限焦點提供z亮的熒光信號以及z高的空間分辨率。然而，只有通過自適應(yīng)光學(xué)(adaptive optics, AO)才能維持在體深度的高空間分辨率，自適應(yīng)光學(xué)可以測量和校正成像光穿過光異質(zhì)樣品時在波前積累的光學(xué)像差。AO與2PFM相結(jié)合，將校正的相位模式應(yīng)用于物鏡后瞳平面(back pupil ...

像以及明場和熒光顯微鏡。幾十年來，解決顯微圖像重建和增強(qiáng)的逆問題一直是研究的熱門話題。先前方法的一個關(guān)鍵組成部分是建立成像系統(tǒng)的前向模型?；谏疃葘W(xué)習(xí)的數(shù)據(jù)驅(qū)動方法為解決光學(xué)顯微鏡中的逆問題提供了另一種途徑。經(jīng)過訓(xùn)練后，DNN可以提供一個非?？焖俚目蚣軄韴?zhí)行圖像重建和增強(qiáng)任務(wù)，而無需任何迭代、參數(shù)調(diào)整或物理前向模型。深度學(xué)習(xí)在光學(xué)顯微鏡中的應(yīng)用包括明場顯微鏡、無透鏡顯微鏡、熒光顯微鏡、超分辨率顯微鏡、共聚焦顯微鏡, 結(jié)構(gòu)照明顯微鏡等。在顯微鏡中也有深度學(xué)習(xí)的新興應(yīng)用，根據(jù)我們目前對光-物質(zhì)相互作用的理解，不可能建立準(zhǔn)確的正向模型。這方面的一個例子是跨模態(tài)圖像轉(zhuǎn)換，其中 DNN使用來自兩種不同成 ...

NIR-II熒光顯微鏡z大的成像深度(超過 900 μm，潛在的白質(zhì)可能成為進(jìn)一步可視化的障礙，圖像細(xì)節(jié)開始變得稀疏)。(5) 離峰NIR-II 熒光成像(即使用發(fā)射尾端而不是峰值區(qū)域)適合使用1400 nm長通 (NIR-IIx + NIR-IIb) 波段。利用IDSe-IC2F，其結(jié)構(gòu)及合成示意見圖8a,b。它的吸收譜見圖8c，發(fā)射譜見圖8d。在這里選用長波通熒光成像，IDSe-IC2F的長波通發(fā)射熒光光譜(900-1700nm,1000-1700nm,1100-1700nm,1200-1700nm,1300-1700nm,1400-1700nm,1500-1700nm)積分強(qiáng)度見圖8e。 ...

肌圖像由光片熒光顯微鏡獲得。視頻顯示了紅細(xì)胞如何流過跳動的心肌。比例尺，50 μm。參考文獻(xiàn)：Wang, Z., Zhu, L., Zhang, H. et al. Real-time volumetric reconstruction of biological dynamics with light-field microscopy and deep learning. Nat Methods 18, 551–556 (2021).DOI：https://doi.org/10.1038/s41592-021-01058-x關(guān)于昊量光電：上海昊量光電設(shè)備有限公司是國內(nèi)知名光電產(chǎn)品專業(yè)代理商， ...

不同于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡，其中激發(fā)波長短于發(fā)射波長，因為兩個激發(fā)光子的波長長于所得發(fā)射光的波長。雙光子激發(fā)顯微通常使用近紅外（1064nm）激發(fā)光，可以激發(fā)熒光染料。使用近紅外的好處是可z大限度地減少組織中的散射。由于多光子吸收，同時能夠減小背景噪聲。這兩種效果都會導(dǎo)致這些顯微鏡的穿透深度增加?；跓晒庵甘緞┑拟}成像提供了一種監(jiān)測動作電位的光學(xué)方法，并被系統(tǒng)的用于補(bǔ)充微電極記錄，測量體內(nèi)的神經(jīng)元活動。這種方法為重建小型模式生物體整個大腦中的神經(jīng)元群的活動開辟了道路。鈣成像技術(shù)結(jié)合雙光子顯微鏡使得在體內(nèi)測量深層神經(jīng)元群體的活動成為可能。隨著熒光顯微鏡技術(shù)的迅速發(fā)展，純相位液晶空間光調(diào)制器在體鈣成像 ...

制出超分辨率熒光顯微鏡”，從此人們對點擴(kuò)散函數(shù) (PSF) 工程的認(rèn)識有了顯著提高。Moerner 展示了 PSF 工程與 Meadowlark Optics SLM 的使用案例，用于熒光發(fā)射器的超分辨率成像和 3D 定位。 PSF工程已被證明使顯微鏡能夠使用多種成像模式對樣本進(jìn)行成像，同時以非機(jī)械方式在模式之間變化。這允許對具有弱折射率的結(jié)構(gòu)進(jìn)行成像，以及對相位結(jié)構(gòu)進(jìn)行定量測量。 已證明的成像方式包括：螺旋相位成像、暗場成像、相位對比成像、微分干涉對比成像和擴(kuò)展景深成像。美國Meadowlark Optics 公司專注于模擬尋址純相位空間光調(diào)制器的設(shè) 計、開發(fā)和制造，有40多年的歷史，該公司 ...